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    多酶恒溫快速擴增技術在大動物分子診斷領域的應用

    發布時間: 2022-08-24  點擊次數: 59次
      多酶恒溫快速擴增技術在大動物分子診斷領域的應用
      如何將傳統分子檢測方法變的更加簡單易懂、操作方便和快速精準。一直是分子檢測行業的一大課題。各個廠家和科研院所都在這方面投入了大量的時間和金錢。
      在熒光檢測領域,MIRA技術將60分鐘以上的核酸擴增階段,縮短到20分鐘。其開發了“核酸膠體金試紙條檢測法”,可徹底拋棄掉高昂的檢測設備,僅需配備簡單的溫控儀器即可(如金屬浴、水浴鍋等),甚至42°溫水和利用人體溫度亦可完成擴增反應,且核酸擴增時間進一步縮短到10分鐘不到。其結果的準確率與傳統PCR檢測方式準確率一致。
      具體操作方法如下:
      1.采用我司自主開發的快速核酸擴增試劑提取核酸(核酸提取劑與樣本混勻,室溫靜置5分鐘即可取上清作為核酸模板),或者采用市場常見“離心柱法”和“磁珠法”提取核酸作為模板亦可;
      2.取上述模板2μL加入到復融后的反應液中,通過上述各種加熱手段,保證加熱溫度在37°~42°之間10分鐘即可。
      3.上述反應時間結束后,向反應液中加入少許無菌水稀釋,后直接插入試紙條,則馬上可通過試紙條上的條帶顏色變化,從而判定陰陽性。
      自主研發用時,引物設計注意事項:
      核酸試紙條三明治夾心檢驗法探針設計:在上下游引物中間設計一條長度為46-52nt與目的片段互補序列;5’端修飾一個抗原標記(典型FAM);5’端和3’端中間位置標記一個dSpacer(THF);3’端標記一個修飾基團,如胺基、生物素或C3-Spacer,同時要求下游引物5’端標記一個修飾基團。
      該方法極其適用于現場核酸提取??蓱糜趥魅静〕鹾Y、食品安全、寵物疾病檢測、活體市場抽檢等各種不具備完整分子檢測條件下的核酸測試。對操作人員專業水平要求低,檢測結果可信度高。
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